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    广誉远定坤丹的药效物质研究最新进展

    来源: 日期:2022-03-04 浏览:6285


    定坤丹始于乾隆四年(1739年),是我国治疗各种妇科疾病的古代经典名方。2004年,广誉远定坤丹处方和工艺技术被科学技术部和国家保密局列为秘密级国家秘密技术。据了解,广誉远定坤丹由30味古法炮制中药材加蜂蜜制作而成,具有滋补气血、调经舒郁的功效,在临床上常用于治疗气血两虚、气滞血瘀所致的月经不调、行经腹痛、崩漏下血、赤白带下、血晕血脱、产后诸虚、骨蒸潮热等。


    为了进一步阐明定坤丹的药效作用机制,海军军医大学张卫东教授团队开展了系列针对性研究,并先后在Biomedical Chromatography杂志发表题为“Systematic characterization of the chemical constituents in vitro and prototypes in vivo of Dingkun Dan by UPLC-Q-TOF/MSE combined with the UNIFITM software”In vivo and in vitro metabolism study of traditional Chinese medicine formula Dingkun Dan in rats by using ultra performance liquid chromatography coupled with quadrupole time-of-flight mass spectrometry”的两篇研究论文,揭示了定坤丹的药效物质基础。

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    新技术鉴定出21个新成分


    为了明确定坤丹全方的化学成分,研究团队采用UPLC-Q-TOF/MSE对各样品进行数据采集,将所得质谱数据及自建数据库导入UNIFI?数据分析平台,对数据进行化合物的匹配鉴定。经标准品比对,文献查阅及质谱信息分析,最终共鉴定了定坤丹的234个化学成分(图1),包括47个三萜皂苷类化合物,55个黄酮类化合物,38个生物碱类化合物及其他类化合物,其中63个化合物使用标准品比对确认(图2),6个联苯环辛烯类成分和15个亚精胺类成分为首次在定坤丹中鉴定,并总结了皂苷类、黄酮类、生物碱类、萜类及苯丙素类化合物的裂解规律。

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    (图注:图1. 定坤丹化学成分的BPI色谱图(A:正离子模式,B:负离子模式))


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    (图注:图2. 定坤丹中63个对照品的化学结构图)


    体内代谢研究揭示潜在药效成分


    根据血清药物化学理论,大鼠口服定坤丹后的入血成分才最有可能是潜在的与药效相关的成分。随后,研究团队开展大鼠口服定坤丹后血浆、尿液、粪便的原型成分和代谢产物的检测与分析。他们采用了UPLC-Q-TOF/MSE 技术对各生物样本进行数据采集,将数据导入UNIFI?数据处理平台,利用提取离子流方法提取定坤丹的化学成分,并结合质谱信息鉴定在体内经吸收的原型成分。利用以上技术和方法,共鉴定体内原型成分140个,其中从血浆中鉴定43个,尿液中鉴定101个,粪便中鉴定110个。同时,通过建立代谢物分析方法对可能的代谢产物进行预测,利用UNIFI?平台进行代谢产物的筛选和匹配。本研究首次对定坤丹的体内代谢产物进行了分析,最终鉴定出代谢产物121个,其中血浆中包含93个,尿液中包含86个,粪便中包含30个。代谢反应类型主要包括羟基化反应、氧化反应、水解反应、甲基化反应、葡萄糖醛酸化反应和硫酸化反应等(图3)。由于黄酮类化合物和苯丙素类化合物是定坤丹中代谢物最丰富的活性成分,通过体外代谢研究平台,对五个不同类型的代表性成分甘草素、黄芩苷、芫花素、阿魏酸和藁本内酯的代谢产物进行验证,共检测到9个代谢物,与推测的分析结果一致。

    通过对定坤丹体内外化学成分的分析与鉴定,本研究揭示了化学物质基础及潜在的药效成分,也有助于更好地了解定坤丹的化学成分在体内的吸收及生物转化过程,为临床用药安全提供理论基础。

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    (图注:图3. 定坤丹中各类成分可能的代谢途径图)

     

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